免疫組化試劑盒(100T)
原理: DAB 染色液是特別敏感的二步法免疫組化試劑盒,適合與兔或鼠源一抗配用。其主要過程為,一抗與切片中的靶抗原形成抗原抗體復合物,酶標羊抗鼠/兔 IgG 聚合物二抗(以多聚葡聚糖分子為骨架,辣根過氧化物酶與羊抗鼠/兔 IgG 形成的聚合物)與抗原抗體復合物中的一抗結合,再利用辣根過氧化物酶催化二氨基聯苯胺(DAB)在抗原部位形成棕色顯色。
產品貨號:RC0080R ;
規格:100T
試劑盒組成:酶標羊抗兔IgG 聚合物二抗 4℃,5mL; DAB 顯色劑(100x) A4℃,100ul;DAB顯色緩沖液 B 4℃,10mL;3%過氧化氫,10mL;
使用方法:DAB顯色緩沖液:DAB 顯色劑(100x)=100:1; DAB顯色工作液液C=A+B;
其他自備試劑:修復液,pbs,BSA等
操作流程如下:
石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
抗原修復:組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液(PH8.0)(其他抗原修復液可以根據情況選擇)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復,中火8min至沸,停火8min保溫再轉中低火7min,此過程中應防止緩沖液過度蒸發,切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
阻斷內源性過氧化物酶:切片放入3%過氧化氫溶液(30%雙氧水:純水=1:9),室溫避光孵育25 min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
非特異性封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加用3%BSA或者專用封閉液均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加按一定比例配好的一抗工作液(可選擇PBS或者一抗稀釋液配制一抗工作液),切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。(濕盒內加少量水防止抗體蒸發)
加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的酶標羊抗鼠/兔IgG 聚合物二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。
DAB顯色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色工作液液C,顯微鏡下控制顯色時間,陽性為棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色。
石蠟切片免疫組化結果判讀
蘇木素染細胞核為藍色,DAB顯出的陽性表達為棕黃色