免疫組化試劑盒（100T）
原理： DAB 染色液是特別敏感的二步法免疫組化試劑盒，適合與兔或鼠源一抗配用。其主要過(guò)程為，一抗與切片中的靶抗原形成抗原抗體復(fù)合物，酶標(biāo)羊抗鼠/兔 IgG 聚合物二抗（以多聚葡聚糖分子為骨架，辣根過(guò)氧化物酶與羊抗鼠/兔 IgG 形成的聚合物）與抗原抗體復(fù)合物中的一抗結(jié)合，再利用辣根過(guò)氧化物酶催化二氨基聯(lián)苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色顯色。
產(chǎn)品貨號(hào)：RC0080R ；
規(guī)格：100T
試劑盒組成：酶標(biāo)羊抗兔/抗鼠IgG 聚合物二抗 4℃，5mL； DAB 顯色劑(100x) A4℃，100ul；DAB顯色緩沖液 B4℃，10mL；3%過(guò)氧化氫，10mL；
使用方法：DAB顯色緩沖液：DAB 顯色劑(100x)=100:1; DAB顯色工作液液C=A+B；
其他自備試劑：修復(fù)液，pbs，BSA等
操作流程如下：
石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿(mǎn)EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）（其他抗原修復(fù)液可以根據(jù)情況選擇）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min至沸，停火8min保溫再轉(zhuǎn)中低火7min，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：切片放入3%過(guò)氧化氫溶液（30%雙氧水：純水=1:9），室溫避光孵育25 min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
非特異性封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周?chē)?huà)圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加用3%BSA或者專(zhuān)用封閉液均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗工作液（可選擇PBS或者一抗稀釋液配制一抗工作液），切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）
加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG 聚合物二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
DAB顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色工作液液C，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為棕黃色，自來(lái)水沖洗切片終止顯色。
石蠟切片免疫組化結(jié)果判讀
蘇木素染細(xì)胞核為藍(lán)色，DAB顯出的陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色
